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嗜热脂肪芽孢杆菌菌种说明

  嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)属嗜热性需氧芽孢杆菌,但兼有厌氧的特性,细菌繁殖体G兰氏染色阳性呈紫色,细菌芽胞孔雀绿着色。嗜热脂肪芽孢杆菌比较容易识别且对人体没有危害性,一般作为空间消毒的指示生物。
  主要特性
  嗜热脂肪地芽孢杆菌营养细胞呈长杆状、圆端,多数为单个、少数成对或链状排列,细胞宽 0. 6 ~ 1.μm、长 2. 0 ~ 3.5μm,细胞壁为革兰阳性结构,但染色可在阳性和阴性之间变化。芽孢呈椭圆或柱状、端生或次端生,孢囊膨胀或不膨胀,无伴孢晶体形成。较佳生长温度为 56 ~ 60℃,较高生长温度为 65 ~ 75℃,较低生长温度为 30 ~ 45℃,需氧或兼性厌氧,利用葡萄糖产酸不产气。现中国工业微生物菌种保藏管理中心( CICC) 收藏菌株为嗜热脂肪地芽孢杆菌编号为 CICC 10267 株,即 ATCC 7953 株,其在营养琼脂上56℃培养 24h 的菌落形态呈浅黄色,表面粗糙湿润,边缘不整齐 ; 该菌株在 Cook等产孢培养基上 56℃培养 24 h,取菌苔涂片经芽孢染色法染色后,1 000倍光学显微镜下观察到多数仍为染成红色的繁殖体与部分已经形成染成蓝色的芽孢形态 ; 在产孢培养基上 56℃培养 5 d,镜下观察到 90% 以上为已经形成染成蓝色的芽孢,只有少数是染成红色的繁殖体。
  培养基
  营养琼脂培养基(NA)
  胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSA)
  培养基(以上三款任选一种即可)
  保藏条件
  斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。
  注意事项
  冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解,接种在 1-2 个斜面上,因冻干粉处于休眠状态,请勿接种多支斜面或平板,以避免因接种量不足而导致复苏不成功;如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;
  微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;
  菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;
  斜面菌种保藏时间通常为 3-6 个月;应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;
  菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和中国微生物菌种查询网联系。
  六、单层冻干管打管说明书
  安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。
  注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的,,开启后必须一次使用完,不能留菌粉下次使用;另外,安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂,里面菌体为少数,复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上,否则可能造成复苏不成功;
  冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,有时延滞期较长,如在说明书建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成;有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说,菌种稳定后才能用于您的后续实验。
  暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏(特殊除外)。
  冻干管打开后需一次用完,不能留存。
  打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。
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