用大豆酪蛋白琼脂培养基检测沉降菌测试方法
方法概述
本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
所用的仪器和设备
⑴高压消毒锅
使用时应严格按照仪器说明书操作。
⑵恒温培养箱
必须定期对培养箱的温度计进行检定。
⑶培养皿
一般采用?90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
⑷培养基
普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A（标准的附录）。
测试步骤
⑴采样方法
将已制备好的培养皿按5.4.1.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
⑵培养
①全部采样结束后，将培养倒置于恒温培养箱中培养。
②在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。
③每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。
⑶菌落计数
①用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不否遗漏。
②若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。
注意事项
⑴测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
⑵采取一切措施防止人为对样本的污染。
⑶对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
⑷由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉定物的区别，必要时用显微镜鉴别。
⑸采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
测试规则
⑴测试状态
①沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
②沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。
③测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
⑵测试人员
①测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
②静态测试时，室内测试人员不得多于二人。
⑶测试时间
①对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。
②对非单向流，如10 000级、100 000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
⑷沉降菌计数
采样点数目及其布置
②较少采样点数目
沉降法的较少采样点数可按表1确定。
表1 较少采样点数目
在满足较少测点数的同时，还宜满足较少培养皿数，见表2。
表2 较少培养皿数
③采样点的布置
采样点的位置可以同悬浮粒子测试点。
）工作区采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
）可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
采样点位置的详细规则见附录B（标准的附录）。
⑸记录
测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。
测试报告的编写见附录C（标准的附录）。
⑹结果计算
①用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
②平均菌落数的计算，见式（1）。
平均菌落数M= ……………（1）
式中：M——平均菌落数；
——1号培养皿菌落数；
——2号培养皿菌落数；
——n号培养皿菌落数；
——培养皿总数。
⑺结果评定
用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
①洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
②若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
